貝克曼DNA純化試劑盒具體的提取流程是怎樣的

更新時(shí)間：2021-06-21

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　　實(shí)驗(yàn)室工作中，經(jīng)常會(huì)需要用到純化的DNA，這時(shí)我們通常需要使用一個(gè)貝克曼DNA純化試劑盒對(duì)目的DNA進(jìn)行分離純化。目前大多數(shù)試劑盒遵循相同的基本步驟:裂解，柱純化，洗滌雜質(zhì)，柱洗脫。然而，不同的盒子在完成每個(gè)步驟的方式上有很大的不同。

　　貝克曼DNA純化試劑盒提供了從各種來(lái)源的細(xì)菌培養(yǎng)液(革蘭氏陽(yáng)性或革蘭氏陰性)中快速簡(jiǎn)單地提取基因組DNA的方法；一次可處理<3ml正處于指數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)菌培養(yǎng)液(1x109細(xì)菌)。

　　該試劑盒采用*的DNA吸附柱純化方式，可在60分鐘內(nèi)同時(shí)進(jìn)行一個(gè)或多個(gè)樣品的純化工作。純化過程不需要用到酚氯仿抽提，也不需要用到耗時(shí)的異丙醇或乙醇沉淀。

　　純化DNA產(chǎn)物可直接用于PCR、酶切和雜交等實(shí)驗(yàn)。一次抽提可純化出10-30μg的高質(zhì)量的基因組DNA。此外，貝克曼DNA純化試劑盒還可以抽提得到除基因組以外遺物質(zhì)，包括質(zhì)粒，Cosmid，BAC等。

　　由于該方法采用溶菌酶(Lysozyme)和玻璃珠(0.1-0.2mm)共同作用來(lái)去除細(xì)胞壁，因而可高效地裂解細(xì)菌，保證DNA的有效回收。對(duì)于大多數(shù)的陰性或陽(yáng)性細(xì)菌，只需使用溶菌酶。

　　從正處于指數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)菌培養(yǎng)液中收集細(xì)菌，細(xì)菌經(jīng)溶菌酶去除細(xì)胞壁，蛋白酶消化細(xì)胞，然后用HiBind硅膠柱結(jié)合DNA，經(jīng)過兩次快速洗滌，最后將DNA溶解在滅菌水或低鹽緩沖液中。