你知道如何使用貝克曼DNA純化試劑盒從動(dòng)物組織中提取基因組DNA嗎？

更新時(shí)間：2022-01-19

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　　貝克曼DNA純化試劑盒是根據(jù)氯化芐法構(gòu)建的，能夠從樣本中提取基因組DNA的試劑盒。具有能將含有纖維素等的細(xì)胞壁中的羥基芐基化，從而破壞細(xì)胞壁的特性。本制品利用了這一特性，將植物樣品凍結(jié)融解后，再使用PipetTip的將植物樣品在Microtube壁上數(shù)次按壓即可破壞細(xì)胞壁。本法與傳統(tǒng)方法相比，省去了液氮研磨等煩瑣步驟，有利于一次性處理大量樣品。而且，本制品經(jīng)過(guò)了改良，熱處理時(shí)間只需15分鐘，使用本制品從實(shí)驗(yàn)開始至水相回收只需30分鐘時(shí)間。得到的基因組DNA可以進(jìn)行PCR擴(kuò)增及限制酶處理等。

　　全套操作約需1小時(shí)，分勻漿、細(xì)胞裂解、除蛋白、DNA純化等步驟，詳細(xì)說(shuō)明如下。

　　勻漿和細(xì)胞裂解:

　　使用不同的實(shí)驗(yàn)材料需采用不同的勻漿步驟，具體說(shuō)明如下：

　　使用研缽進(jìn)行勻漿時(shí)：

　　①取1～100mg的動(dòng)物組織或人組織移入冰浴預(yù)冷的研缽中，快速用力展研成勻漿。

　　注）下列組織請(qǐng)加液氮研磨至粉末狀。

　　A．富含DNA酶的胰臟、脾臟、胸腺、淋巴等組織。

　　B．富含膠原蛋白的皮膚、肌腱等組織。

　　C．富含角質(zhì)蛋白的組織或堅(jiān)硬的組織（如骨骼）等。

　　②加入650μl的SolutionA和0.9μl的RNaseA1，溫和研磨30秒鐘。

　　注）使用上述①-注）的實(shí)驗(yàn)材料時(shí)，請(qǐng)?jiān)诩尤隨olutionA及RNaseA1后，將研缽置于65℃水浴上研磨1分鐘。

　?、凼占?50μl研磨好的組織勻漿液移至CollectionTube中。如果勻漿體積不足650μl，請(qǐng)補(bǔ)充SolutionA至650μl，65℃保溫5分鐘。

　　使用研磨棒進(jìn)行勻漿時(shí):

　?、偃?～100mg的動(dòng)物組織或人組織移入冰浴預(yù)冷的CollectionTube中，用研磨棒快速研磨成糊狀。

　?、诩尤?50μl的SolutionA和0.9μl的RNaseA1后用研磨棒快速研磨成勻漿。

　?、奂尤?50μl的SolutionA將研磨棒上的勻漿沖入CollectionTube中，充分振蕩混合后，65℃保溫5分鐘。